一、全自動多肽合成儀設(shè)備校準(zhǔn)與準(zhǔn)備
安裝與調(diào)試
由專業(yè)技術(shù)人員進行設(shè)備的安裝和調(diào)試，確保設(shè)備能夠正確運行。
檢查溶劑儲液瓶與氣體管道是否連接好，儀器各部分是否完好。
打開合成儀電源開關(guān)及壓縮空氣開關(guān)，檢查壓力是否符合范圍(如“AIR”表壓力大于60psi而小于100psi；“N2”表壓力大于5psi而小于10psi)。
校準(zhǔn)與測試
根據(jù)制造商的說明書進行設(shè)備的校準(zhǔn)和測試，確保所有系統(tǒng)(如泵、閥、檢測器等)都運行正常。
進行溫度、條形碼、反應(yīng)器混合攪拌、取液針、氨基酸推瓶的測試；電磁閥測試；化學(xué)試劑瓶和氨基酸瓶的流量校準(zhǔn)；UV控制校準(zhǔn)。
選擇合適的反應(yīng)容器
根據(jù)合成規(guī)模選擇合適的反應(yīng)容器，并確保容器的材料不會與反應(yīng)物或溶劑發(fā)生反應(yīng)。
二、試劑與材料準(zhǔn)備
試劑準(zhǔn)備
準(zhǔn)備合成用的氨基酸、活化試劑、溶劑等，確保所有材料都是新鮮且純凈的，以避免雜質(zhì)的引入。
根據(jù)合成方案，按照所需的物質(zhì)比例進行稱量，確保準(zhǔn)確性。
將試劑依次裝入各貼有相應(yīng)標(biāo)簽的儲液瓶內(nèi)。
樹脂準(zhǔn)備
將樹脂加入固相合成儀中，用適當(dāng)?shù)娜軇?如DCM)溶脹樹脂，然后抽干。
使用DMF等溶劑洗滌樹脂，以去除雜質(zhì)，洗滌結(jié)束后抽干備用。
三、合成操作
設(shè)置反應(yīng)條件
根據(jù)所需多肽的序列和長度設(shè)定合適的反應(yīng)條件，包括溫度、壓力、時間等。
脫保護
去除前一個氨基酸的保護基團，使其能夠與下一個氨基酸發(fā)生反應(yīng)。
例如，使用40%三氟乙酸/二氯甲烷溶液脫保護，之后用二氯甲烷、甲醇等洗滌。
偶聯(lián)
將新的氨基酸與已脫保護的氨基酸結(jié)合，形成肽鍵。
將第一個氨基酸(通常從C端開始)用一定體積的DMF溶解，并加入縮合劑(如DCC、HBTU等)進行活化。
將活化后的氨基酸溶液投入固相合成儀中，補充DMF至適當(dāng)反應(yīng)濃度，攪拌進行縮合反應(yīng)。
洗滌
清洗掉未反應(yīng)的物質(zhì)和副產(chǎn)物，確保反應(yīng)的純度。
每完成一步合成后，都需要通過洗滌來清除反應(yīng)產(chǎn)生的副產(chǎn)品和未反應(yīng)的原料，減少雜質(zhì)的積累。
重復(fù)步驟
重復(fù)脫保護和偶聯(lián)步驟，直到多肽鏈達到預(yù)定長度。
四、產(chǎn)物切割與提純
樹脂裂解
配置裂解液(通常包含TFA等強酸)，并提前置冰柜中冷藏保存。
將肽樹脂加入反應(yīng)釜中，加入預(yù)冷的裂解液，攪拌反應(yīng)以將多肽從樹脂上裂解下來。
裂解結(jié)束后放出反應(yīng)液，抽濾除去樹脂并以TFA等溶劑洗滌。
多肽純化
將裂解液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中室溫濃縮至小體積。
使用適當(dāng)?shù)某恋韯?如甲基叔丁基醚)使多肽析出，并通過離心、洗滌等步驟得到粗肽。
使用高效液相色譜(HPLC)等方法對粗肽進行純化，以去除雜質(zhì)并分離出目標(biāo)多肽。
濃縮、過濾與凍干
將純化后的多肽溶液旋蒸除去有機溶劑，得到濃縮的多肽溶液。
對濃縮后的多肽溶液進行無菌過濾。
將過濾后的多肽溶液置于凍干機中，設(shè)定適當(dāng)?shù)纳郎爻绦蜻M行凍干處理。
五、質(zhì)量控制與記錄
監(jiān)控反應(yīng)進程
使用適當(dāng)?shù)臋z測方法(如紫外檢測、質(zhì)譜分析等)監(jiān)控反應(yīng)進程，確保每一步的反應(yīng)都按預(yù)期進行。
記錄與報告
詳細記錄每一步的操作參數(shù)和結(jié)果，包括試劑使用量、反應(yīng)時間、溫度、壓力等。
生成實驗報告，總結(jié)合成過程中的關(guān)鍵數(shù)據(jù)和產(chǎn)物純度等信息。
